Integrin αL/ITGAL/CD11a Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402246-NIC

ITGAL codifica a integrina αL (CD11a), que forma um heterodímero com a integrina β2 (CD18) para constituir a LFA-1, um recetor de adesão de leucócitos essencial para o tráfego de células imunitárias e para interações célula–célula. A ligação da LFA-1 aos ligandos da família ICAM regula a adesão firme, a migração transendotelial e a formação da sinapse imunológica, acoplando sinais extracelulares à remodelação do citoesqueleto e a vias de sinalização como a sinalização de integrinas “outside-in”, a ativação de cinases da família SRC e processos associados a adesões focais. A atividade de ITGAL influencia os limiares de ativação dos linfócitos, as funções efetoras dependentes de antigénio e a coordenação das respostas inflamatórias. Interações LFA-1–ICAM desreguladas e alterações na expressão de ITGAL estão implicadas em patologia mediada pelo sistema imunitário e em defeitos de adesão leucocitária, sustentando a sua utilização em estudos de inflamação, autoimunidade e dinâmica do microambiente tumoral–imunitário.

Integrin αL/ITGAL/CD11a O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGAL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGAL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGAL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGAL interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.