Integrin α6/ITGA6/CD49f Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400380-NIC

ITGA6 codifica a integrina α6 (CD49f), uma subunidade α que se associa principalmente a β1 ou β4 para formar recetores de ligação à laminina que medeiam a adesão célula–matriz extracelular. Complexos de integrina α6 coordenam a adesão focal e a sinalização associada a hemidesmossomas para regular a polaridade epitelial, a migração e a sobrevivência por vias que incluem FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. O CD49f é amplamente utilizado como marcador associado a progenitores epiteliais e a compartimentos com características de células estaminais, refletindo o seu papel na manutenção da arquitetura tecidular e das interações com o nicho. A expressão desregulada de ITGA6 ou a sinalização alterada de integrinas está associada a invasão, disseminação metastática e fenótipos de resistência a terapias em múltiplos contextos tumorais, bem como a processos relacionados com a membrana basal e com bolhas cutâneas através de estruturas de ancoragem dependentes de α6β4.

Integrin α6/ITGA6/CD49f O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGA6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGA6. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGA6. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGA6 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.