Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400216-ACT

ITGB3 codifica a integrina β3 (CD61), um recetor de adesão transmembranar que forma heterodímeros com a αIIb (formando αIIbβ3) ou com a αV (formando αVβ3) para mediar a ligação a ligandos da matriz extracelular, como fibrinogénio, vitronectina e fibronectina. Por meio da montagem de adesões focais e da sinalização outside-in/inside-out, a integrina β3 coordena a adesão celular, a agregação plaquetária, a remodelação do citoesqueleto e a migração, através de vias que incluem FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. A atividade de ITGB3 é central para a função plaquetária e a formação de trombos, e também contribui para as interações de células endoteliais e tumorais com o microambiente. A desregulação da sinalização da integrina β3 tem sido associada a alterações da hemostase, inflamação e processos que sustentam a angiogénese e a metastização em múltiplos contextos de doença.

Integrin β3/ITGB3/CD61 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β3/ITGB3/CD61. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β3/ITGB3/CD61 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β3/ITGB3/CD61 em células tumorais com expressão de ITGB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.