Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickase Plasmid (m): sc-430957-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Integrin α1/ITGA1/CD49a Double-Nickase-Plasmid (m) und Integrin α1/ITGA1/CD49a Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Itga1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Integrin α1/ITGA1/CD49a: sc-271034
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickase Plasmid (m) | sc-430957-NIC | 20 µg | $410.00 |
Itga1 kodiert Integrin α1 (ITGA1/CD49a), eine α‑Untereinheit, die mit β1 zu dem α1β1‑Kollagen-/Lamininrezeptor dimerisiert und so die Bindung an die extrazelluläre Matrix mit intrazellulärer Signalübertragung und Zytoskelett‑Remodelling verknüpft. Die ITGA1‑vermittelte Adhäsion reguliert Zellmigration, Überleben und Mechanotransduktion über Fokaladhäsionskomplexe und nachgeschaltete Signalwege wie FAK/Src, MAPK/ERK und PI3K/AKT und beeinflusst zudem die Gewebeorganisation sowie entzündliche Zell‑Matrix‑Interaktionen. In Mausmodellen wurde eine veränderte Itga1‑Funktion mit einer Fehlregulation des Leukozyten‑Traffickings, fibroseassoziiertem Matrix‑Remodelling und kontextabhängigen Veränderungen der Tumorzellinvasion und der Stromabiologie in Verbindung gebracht. Diese Funktionen machen ITGA1 zu einem nützlichen Ziel, um die Wahrnehmung der extrazellulären Matrix, die Retention von Immunzellen und kollagengetriebene Signalgebung in entwicklungs- und krankheitsrelevanten Mikroumgebungen zu untersuchen.
Integrin α1/ITGA1/CD49a Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Itga1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Itga1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Itga1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Itga1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.