Ini1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401485-ACT

SMARCB1（Ini1）は、ヌクレオソームの配置とクロマチンのアクセシビリティを調節する、SWI/SNF（BAF）ATP依存性クロマチンリモデリング複合体の中核サブユニットをコードしています。Ini1は転写プログラムを広範に制御することにより、エンハンサーおよびプロモーター活性を調節して、細胞周期の進行、分化、系譜（ライン）決定、DNA損傷応答に影響を与えます。SMARCB1の異常は、エピジェネティック制御の破綻やシグナル伝達ネットワークの変化と関連し、SMARCB1欠損悪性腫瘍を含む腫瘍生物学、ならびにSWI/SNF機能不全を伴うその他のがんにおいて強い関連性を示します。これらの特性により、SMARCB1はクロマチン状態遷移、転写因子の協調作用、ゲノムワイドな遺伝子制御を研究するうえで高い価値を持つ標的となります。

Ini1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMARCB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ini1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMARCB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMARCB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ini1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMARCB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIni1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMARCB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIni1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。