IMPDH2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410835-ACT

ヒトIMPDH2は、デノボのグアニンヌクレオチド生合成における律速酵素であるイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ2（inosine monophosphate dehydrogenase 2）をコードしており、IMPをXMPへ変換して細胞内のGTPプールの維持に寄与します。ヌクレオチドの利用可能性を制御することで、IMPDH2はDNA/RNA合成、リボソーム生合成、細胞増殖を支え、免疫活性化や腫瘍性増殖に伴う代謝リモデリングプログラムと結び付いています。IMPDH2活性はプリン代謝と交差し、複製ストレス応答や転写能に影響を与える、より広範なヌクレオチド恒常性維持経路とも関与します。IMPDH2の発現変化やIMPDH2への依存性は、さまざまながんや、免疫・炎症細胞の増殖・拡大が起こる状況で報告されており、細胞状態の代謝制御を研究するうえで有用な結節点となります。

IMPDH2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IMPDH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IMPDH2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IMPDH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIMPDH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IMPDH2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIMPDH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIMPDH2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIMPDH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIMPDH2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。