Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ILKAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405879
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ILKAP CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してILKAPゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ILKAP 抗体 (41): sc-136341
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ILKAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-405879 | 20 µg | $397.00 |
概要
ILKAP（インテグリン結合キナーゼ関連セリン／スレオニンホスファターゼ2C）は、インテグリン連関シグナル伝達複合体と結合し、細胞接着および細胞骨格構築のリン酸化依存的制御を調節するPP2Cファミリーのホスファターゼをコードします。インテグリン／ECM（細胞外マトリックス）関連経路内の特定基質を脱リン酸化することで、ILKAPは細胞移動、メカノトランスダクション、ならびに増殖因子応答性シグナルの出力に影響を及ぼし得ます。ILKAPの発現や活性の変化は、接着シグナルの破綻、ストレス応答、悪性形質を支える経路のリワイヤリング（再配線）といった文脈で研究されています。その結果、ILKAPは腫瘍細胞の浸潤、サバイバルシグナル、ならびに接着依存的な増殖制御のモデルにおいて、しばしば解析対象となります。
ILKAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるILKAP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ILKAP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ILKAPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ILKAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、ILKAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ILKAP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- ILKAPの機能に不可欠なILKAPエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、ILKAPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- ILKAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびILKAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ILKAP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
ILKAP HDRプラスミド（h）および ILKAP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはILKAPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のILKAP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。