IL-8RB Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401404-LAC

CXCR2 codifica il recettore beta dell’interleuchina-8 (IL-8RB), un GPCR di classe A che lega chemochine CXC ELR+ come CXCL8/IL-8 per coordinare la chemiotassi e l’attivazione dei leucociti. In seguito al legame con il ligando, IL-8RB segnala attraverso vie dipendenti da Gαi per regolare PI3K–AKT, PLCβ–flusso di Ca²⁺, le cascate MAPK/ERK e l’internalizzazione del recettore mediata da β-arrestina, modulando il traffico infiammatorio e le funzioni effettrici dei neutrofili. L’attività di CXCR2 si interseca con i programmi delle citochine e di NF-κB e influenza le interazioni endoteliali, i segnali angiogenici e il rimodellamento nei tessuti infiammati. Una segnalazione deregolata di CXCR2 è implicata in stati infiammatori cronici e nell’infiammazione associata ai tumori, a supporto di studi meccanicistici sul reclutamento delle cellule immunitarie e sulla segnalazione del microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-8RB (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CXCR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-8RB (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CXCR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-8RB. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CXCR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.