IL-2Rα Double Nickaseプラスミド (h): sc-401262-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IL-2Rα Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IL-2Rαダブルニカースプラスミド（h）およびIL-2Rαダブルニカースプラスミド（h2）は、IL2RAを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IL-2Rα 抗体 (C-9): sc-393326
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IL-2Rα Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-2Rα Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IL2RA はインターロイキン2受容体α鎖（IL-2Rα、CD25）をコードしており、IL2RB および IL2RG と協調して IL-2 を感知する、IL-2 受容体複合体の高親和性構成要素です。IL-2Rα を含む受容体がリガンドと結合すると、JAK1/JAK3 依存的な STAT5 シグナル伝達と、T 細胞の増殖・生存・分化を制御するより広範な転写プログラムが誘導され、とりわけ制御性 T 細胞の維持と免疫恒常性に重要です。CD25 の発現はリンパ球の活性化に伴い動的に調節され、IL-2/STAT 軸におけるサイトカイン応答性の微調整に寄与します。IL2RA のシグナル伝達や発現の破綻は、免疫介在性病態や T 細胞の機能状態の変化と関連づけられており、免疫学の機序解明研究における一般的な標的となっています。
IL-2Rα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IL2RA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IL2RA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IL2RAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IL2RAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。