IL-1RII Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421099-ACT

Il1r2 del topo codifica il recettore dell’interleuchina-1 di tipo II (IL-1RII), un recettore-esca ad alta affinità che lega IL-1α e IL-1β per limitare la segnalazione produttiva attraverso IL-1R1. Sequestrando i ligandi e modulando la disponibilità del complesso recettoriale, IL-1RII modella l’attivazione dell’immunità innata e i programmi trascrizionali infiammatori collegati agli output delle vie NF-κB e MAPK. L’espressione di IL-1RII è regolata in modo dinamico nei compartimenti mieloide e stromale, influenzando le reti citochiniche, il reclutamento dei leucociti e la risoluzione dell’infiammazione. Un controllo disfunzionale dell’asse dell’IL-1, incluso un’alterazione dei livelli di IL-1RII, è stato associato a fenotipi infiammatori cronici e a patologie immuno-mediate in modelli sperimentali di malattia nel topo.

IL-1RII Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Il1r2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-1RII Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Il1r2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Il1r2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-1RII. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Il1r2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-1RII nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-1RII nelle cellule tumorali con espressione di Il1r2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.