IL-17R Plasmide Double Nickase (m): sc-421093-NIC

Il17ra del topo codifica IL-17R, una subunità recettoriale transmembrana di tipo I che lega le citochine della famiglia IL-17 per avviare una segnalazione pro-infiammatoria nei compartimenti epiteliale e stromale, nonché nelle linee mieloidi. Il legame con il ligando promuove il reclutamento dell’adattatore ACT1 e l’attivazione delle vie a valle NF-κB, MAPK e C/EBP, inducendo programmi di chemochine e citochine che coordinano la mobilizzazione dei neutrofili e l’immunità di barriera. La segnalazione di IL-17R si intreccia con le risposte immunitarie guidate dalle cellule Th17 e contribuisce all’infiammazione e al rimodellamento tissutale in modelli di malattie autoimmuni e infiammatorie, tra cui artrite, dermatite e infiammazione delle vie aeree. Chiarire la funzione di Il17ra è quindi importante per studiare i meccanismi di difesa dell’ospite mediati dalle citochine e la regolazione delle reti infiammatorie nei sistemi murini.

IL-17R Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Il17ra nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Il17ra. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Il17ra. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Il17ra interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.