IL-12Rβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406442
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IL-12Rβ2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IL-12Rβ2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IL-12Rβ2 Antibody (2H6): sc-293379
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IL-12Rβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406442 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
IL12RB2 codifica la catena beta 2 del recettore dell’interleuchina-12 (IL-12Rβ2), una subunità di segnalazione che si associa a IL-12Rβ1 per formare il complesso recettoriale funzionale dell’IL-12 su cellule T e cellule NK. In seguito al legame con l’IL-12, il recettore attiva la segnalazione di STAT4 dipendente da JAK2/TYK2, promuovendo la polarizzazione Th1, la produzione di IFN-γ e programmi immunitari citotossici che modellano l’immunità cellulo-mediata. L’espressione di IL-12Rβ2 e la competenza di segnalazione influenzano la differenziazione e le funzioni effettrici nei microambienti immunitari infiammatori e associati al tumore, collegando questo asse alla disregolazione immunitaria e a risposte anti-patogeno o antitumorali alterate. L’attività disregolata di IL12RB2 è stata studiata in contesti di infiammazione cronica, evasione immunitaria e suscettibilità alle infezioni, attraverso reti trascrizionali guidate da STAT4 compromesse.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-12Rβ2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IL12RB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IL12RB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IL12RB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-12Rβ2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IL12RB2 per lo studio della segnalazione di IL-12Rβ2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni IL12RB2 critici per la funzione di IL-12Rβ2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IL12RB2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IL-12Rβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-12Rβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IL12RB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IL-12Rβ2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-12Rβ2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IL12RB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IL12RB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.