IL-12Rβ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404602-ACT

IL12RB1 codifica a subunidade beta 1 do receptor de interleucina-12 (IL-12Rβ1), uma subunidade receptora compartilhada para a sinalização de IL-12 e IL-23, expressa principalmente em células T ativadas, células NK e células apresentadoras de antígeno. Após a ligação da citocina com as cadeias receptoras parceiras, a IL-12Rβ1 sustenta a ativação da via JAK-STAT, promovendo a produção de IFN-γ, a diferenciação Th1 e a coordenação de respostas imunes antimicrobianas. Por meio de seu papel em redes de sinalização dependentes de IL-12/IL-23, a IL-12Rβ1 ajuda a moldar a inflamação e a imunidade celular, tornando-se um ponto-chave para estudos de polarização imune induzida por citocinas. Variações ou desregulação nesse eixo são comumente avaliadas no contexto de fenótipos de imunodeficiência, suscetibilidade a patógenos intracelulares e distúrbios inflamatórios do sistema imune relevantes para a biologia de doenças humanas.

IL-12Rβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL12RB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-12Rβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL12RB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL12RB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-12Rβ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL12RB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-12Rβ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-12Rβ1 em células tumorais com expressão de IL12RB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.