IKK alpha Double Nickaseプラスミド (h): sc-400492-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IKK alpha Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IKK alphaダブルニカースプラスミド（h）およびIKK alphaダブルニカースプラスミド（h2）は、CHUKを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IKK alpha 抗体 (B-8): sc-7606
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IKK alpha Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IKK alpha Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHUKはIκBキナーゼ複合体の触媒サブユニットであるIKKα（IKK alpha）をコードしており、IκBの安定性をリン酸化依存的に制御することでNF-κBシグナル伝達と、その下流の転写プログラムを調節します。典型的なNF-κB活性化にとどまらず、IKKαはNF-κB2のp100をp52へとプロセシングする非典型（ノンカノニカル）NF-κBシグナルにおいて重要な役割を担い、リンパ器官の形成、B細胞成熟、炎症関連遺伝子の発現に影響します。さらにIKKαは、細胞の生存・分化・ストレス応答を制御する経路とも連携し、状況依存的に増殖とアポトーシスの調節へとCHUK活性を結び付けます。IKKα/NF-κB軸の制御異常は、炎症関連がんの腫瘍生物学、免疫調節異常、慢性炎症性疾患の機序において頻繁に研究されています。
IKK alpha ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHUK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHUK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHUKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHUKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。