Particules Lentivirales d'Activation (h) IGF2BP3: sc-402603-LAC

IGF2BP3 (insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3) est une protéine oncofœtale de liaison à l’ARN qui régule l’expression génique post-transcriptionnelle en se liant aux ARNm cibles, en les stabilisant et en modulant leur localisation et leur traduction. Elle participe à la dynamique des granules d’ARN et influence des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, la migration et les réponses au stress, en partie via le contrôle de transcrits impliqués dans les voies de signalisation PI3K–AKT et MAPK. L’expression d’IGF2BP3 est faible dans la plupart des tissus adultes, mais elle est fréquemment augmentée dans de nombreux types de tumeurs, où elle est associée à des phénotypes agressifs et à des programmes de différenciation altérés. IGF2BP3 est donc largement étudiée comme un nœud mécanistique reliant la détermination du devenir des ARNm à des états cellulaires prolifératifs et invasifs.

Les particules d'activation lentivirales IGF2BP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IGF2BP3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IGF2BP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IGF2BP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IGF2BP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IGF2BP3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.