IGF2BP3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402603-LAC

IGF2BP3 (proteína 3 ligante ao mRNA do fator de crescimento semelhante à insulina 2) é uma proteína oncofetal de ligação a RNA que regula a expressão gênica pós-transcricional ao se ligar e estabilizar mRNAs-alvo e ao modular sua localização e tradução. Ela participa da dinâmica de grânulos de RNA e influencia vias que governam a progressão do ciclo celular, a migração e as respostas ao estresse, em parte por meio do controle de transcritos envolvidos nas saídas de sinalização de PI3K–AKT e MAPK. A expressão de IGF2BP3 é baixa na maioria dos tecidos adultos, mas é frequentemente aumentada em múltiplos tipos de tumor, nos quais se associa a fenótipos agressivos e a programas de diferenciação alterados. Como resultado, IGF2BP3 é amplamente estudada como um nó mecanístico que conecta a determinação do destino do mRNA a estados celulares proliferativos e invasivos.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGF2BP3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de IGF2BP3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGF2BP3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição IGF2BP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IGF2BP3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo IGF2BP3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.