IFN-α/βRα Plasmide Double Nickase (m): sc-421047-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IFN-α/βRα Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IFN-α/βRα Double Nickase Plasmid (m) e il IFN-α/βRα Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ifnar1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IFN-α/βRα Antibody (E-12): sc-393089
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IFN-α/βRα Plasmide Double Nickase (m) | sc-421047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFN-α/βRα Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ifnar1 codifica la subunità alfa del recettore per l’interferone alfa/beta (IFN-α/βRα), componente essenziale del complesso recettoriale dell’interferone di tipo I che avvia la segnalazione antivirale e immunomodulante in seguito al legame di IFN-α/β. L’attivazione del recettore stimola JAK1 e TYK2, promuovendo la fosforilazione di STAT1/STAT2, l’assemblaggio di ISGF3 con IRF9 e la trascrizione dei geni stimolati dall’interferone, che regolano l’attivazione dell’immunità innata, la presentazione dell’antigene e la sopravvivenza cellulare. La segnalazione mediata da IFNAR1 interagisce inoltre con le vie di NF-κB e MAPK, modulando le risposte infiammatorie e il crosstalk con le risposte dei recettori di riconoscimento del patogeno. Programmi dipendenti da IFNAR1 deregolati sono spesso studiati in contesti di suscettibilità virale, infiammazione cronica e disregolazione immunitaria associata all’autoimmunità, nonché nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario.
IFN-α/βRα Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ifnar1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ifnar1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ifnar1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ifnar1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.