IFN-α/βRα Double Nickaseプラスミド (m): sc-421047-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IFN-α/βRα Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IFN-α/βRαダブルニカースプラスミド（m）およびIFN-α/βRαダブルニカースプラスミド（m2）は、Ifnar1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IFN-α/βRα 抗体 (E-12): sc-393089
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IFN-α/βRα Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFN-α/βRα Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウス Ifnar1 は、インターフェロンα/β受容体α（IFN-α/βRα）をコードしており、IFN-α/βの結合により抗ウイルス作用および免疫調節シグナルを開始するI型インターフェロン受容体複合体の中核サブユニットである。受容体が活性化されるとJAK1およびTYK2が活性化し、STAT1/STAT2のリン酸化、IRF9とのISGF3複合体の形成、そして自然免疫の活性化、抗原提示、細胞生存を制御するインターフェロン刺激遺伝子（ISG）の転写が誘導される。IFNAR1シグナルはNF-κBやMAPK経路とも交差して炎症性出力を形成し、パターン認識受容体応答とのクロストークにも関与する。IFNAR1依存性プログラムの制御破綻は、ウイルス感受性、慢性炎症、自己免疫に伴う免疫調節異常、ならびに腫瘍—免疫相互作用といった文脈で頻繁に研究されている。
IFN-α/βRα ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ifnar1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ifnar1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ifnar1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ifnar1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。