IFITM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428653

Panoramica

Ifitm5 codifica la proteina transmembrana 5 indotta dall’interferone (IFITM5), una piccola proteina associata alla membrana con espressione fortemente ristretta alle cellule della linea osteoblastica e con un ruolo chiave nella mineralizzazione dello scheletro. IFITM5 contribuisce alla differenziazione degli osteoblasti e alla deposizione della matrice extracellulare, influenzando processi quali l’organizzazione del collagene e la formazione di idrossiapatite durante lo sviluppo e il rimodellamento osseo. Alterazioni genetiche di IFITM5 sono collegate a proprietà anomale della matrice ossea e sono state associate a fenotipi di osteogenesi imperfetta, rendendola rilevante per gli studi sulla fragilità ossea e sul ridotto accumulo di minerale. Nei modelli murini, Ifitm5 rappresenta un punto di accesso utile per analizzare le vie di segnalazione intrinseche degli osteoblasti che controllano la qualità dell’osso e le risposte a segnali dello sviluppo e infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifitm5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifitm5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifitm5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFITM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifitm5 per lo studio della segnalazione di IFITM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifitm5 critici per la funzione di IFITM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifitm5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFITM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFITM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifitm5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFITM5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFITM5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifitm5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifitm5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.