IFITM3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403281-NIC

IFITM3（インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質3）は、インターフェロン刺激によって発現が誘導されるエンドリソソーム膜タンパク質で、膜融合を制限し、エンドサイトーシスのトラフィッキングを調節することで、エンベロープウイルスの侵入を抑制します。その発現はI型／II型インターフェロンシグナルによって制御され、感染時に膜組成や小胞動態を再編する自然免疫防御プログラムに寄与します。IFITM3は炎症応答とも関連しており、膜構造の制御や受容体トラフィッキングへの影響を介して、免疫細胞シグナル伝達、ストレス応答、腫瘍生物学における役割についても研究されています。IFITM3の遺伝的多型や発現量の違いは、ウイルス感染に対する感受性や重症度のばらつきと関連づけられており、宿主―病原体相互作用の研究における重要性を裏づけています。

IFITM3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IFITM3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IFITM3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IFITM3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IFITM3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。