IFIT2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403830-NIC

テトラトリコペプチドリピート（TPR）を有するインターフェロン誘導タンパク質2（IFIT2）は、インターフェロン刺激遺伝子の一つであり、細胞質に存在する抗ウイルスエフェクターをコードする。IFIT2はRNA種に結合し、自然免疫応答において翻訳およびRNA代謝を調節する。IFIT2は、JAK–STAT経路およびISGF3による転写制御を介したI型インターフェロンシグナルの下流で誘導され、他のIFITファミリーメンバーとともに、より広範な抗ウイルスプログラムに組み込まれる。ウイルスおよび宿主RNAとの相互作用、ならびにストレス経路やアポトーシス経路の制御を通じて、IFIT2はウイルス複製の抑制と炎症性出力の形成に寄与する。IFIT2発現の制御異常は、感染、がん生物学、免疫介在性疾患で観察されるインターフェロン・シグネチャーの変化と関連づけられており、インターフェロン経路の制御を解明するうえで有用な結節点となっている。

IFIT2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IFIT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IFIT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IFIT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IFIT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。