Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFIT1: sc-403066-ACT

La protéine induite par l’interféron contenant des répétitions tétratricopeptidiques 1 (IFIT1) est le produit d’un gène stimulé par l’interféron qui se lie aux ARN viraux et aux ARN présentant des coiffes anormales, notamment les structures 5′-triphosphate et cap0, afin de restreindre la traduction et d’amplifier les défenses de l’immunité innée. IFIT1 agit dans la signalisation des interférons de type I/III en aval de l’activation JAK–STAT, en s’intégrant à des voies de récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR) telles que RIG-I/MDA5 et TLR3 pour façonner l’état antiviral. Par ses interactions avec la machinerie d’initiation de la traduction et avec d’autres membres de la famille IFIT, elle module le métabolisme de l’ARN et les programmes de synthèse protéique lors de l’activation immunitaire. Une expression dérégulée d’IFIT1 a été associée à des réponses antivirales modifiées et à des signatures transcriptionnelles inflammatoires observées lors d’infections, d’interféronopathies et dans des microenvironnements tumoraux immunitaires, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique pour la recherche en immunologie et en virologie.

IFIT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFIT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFIT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFIT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFIT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFIT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFIT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFIT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFIT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFIT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.