IFI-16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416568-ACT

A IFI16 humana (IFI-16) é um sensor nuclear de DNA e uma proteína induzível por interferon que ajuda a coordenar a vigilância imune inata de ácidos nucleicos aberrantes ou estranhos. A IFI-16 participa da sinalização de interferon dependente de STING e de respostas associadas ao inflamassoma, influenciando programas transcricionais ligados à defesa antiviral, ao controle do ciclo celular e à regulação associada à cromatina. Por meio de interações com a maquinaria de dano ao DNA e de transcrição, a IFI-16 pode modular respostas celulares ao estresse e vias associadas à senescência. A atividade desregulada de IFI16 tem sido associada à sinalização inflamatória, a fenótipos de restrição viral e a mecanismos de doenças relacionadas ao sistema imune, tornando-a um nó útil para estudar a detecção de ácidos nucleicos e o crosstalk entre vias de interferon.

IFI-16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFI-16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFI-16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFI-16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFI-16 em células tumorais com expressão de IFI16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.