Plásmido CRISPR de Activación (h) IDH2: sc-401417-ACT

IDH2 codifica la isocitrato deshidrogenasa mitocondrial dependiente de NADP+ que cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato a α-cetoglutarato, generando a la vez NADPH. Esta actividad sostiene la homeostasis redox mitocondrial, alimenta las defensas antioxidantes y conecta el ciclo del ácido tricarboxílico con la biosíntesis celular y la regulación epigenética a través de dioxigenasas dependientes de α-cetoglutarato. La alteración de la función de IDH2 puede reprogramar el metabolismo y la señalización redox, influyendo en los estados de diferenciación y en las respuestas al estrés en diversos tipos celulares. Las perturbaciones recurrentes de IDH2 se estudian por su papel en la remodelación metabólica oncogénica y por sus efectos posteriores sobre la cromatina y los programas transcripcionales.

IDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IDH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IDH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IDH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IDH2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IDH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IDH2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IDH2 en células tumorales con expresión de IDH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.