Id2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400550-ACT

A ID2 humana (inibidor da ligação ao DNA 2) codifica uma proteína do tipo hélice–alça–hélice (HLH) que não possui um domínio de ligação ao DNA e atua ao formar heterodímeros com proteínas E para restringir programas transcricionais específicos de linhagem. A Id2 regula decisões de destino celular, proliferação e diferenciação em contextos imunes, neurais e epiteliais, integrando sinais de vias como TGF-β/BMP e MAPK para moldar os resultados transcricionais. Ao modular redes gênicas dirigidas por bHLH, a ID2 influencia processos que incluem a manutenção de células-tronco/progenitoras e a diferenciação terminal, o que a torna relevante para estudos de regulação do desenvolvimento e de crescimento desregulado. Alterações na expressão e na atividade de ID2 têm sido associadas a estados transcricionais oncogênicos e a perturbações na diferenciação em múltiplos sistemas modelo relevantes para doenças.

Id2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ID2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Id2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ID2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ID2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Id2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ID2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Id2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Id2 em células tumorais com expressão de ID2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.