ICK Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406371-LAC

A quinase de células intestinais (ICK) é uma proteína quinase de serina/treonina da família CMGC que integra sinais responsáveis por controlar a progressão do ciclo celular, a biologia do cílio primário e a dinâmica do citoesqueleto. A ICK localiza-se no cílio e no corpo basal, onde regula o transporte intraflagelar e o comprimento ciliar, associando-a à sinalização do desenvolvimento dependente de Hedgehog e ao controle proliferativo. Alterações na atividade da ICK têm sido associadas a fenótipos relacionados a ciliopatias e a distúrbios do desenvolvimento, e a desregulação de redes de sinalização de quinases envolvendo a ICK tem sido investigada em contextos de crescimento e diferenciação aberrantes. Como resultado, a ICK é um alvo útil para dissecar vias dependentes de quinases que conectam a ciliogênese a programas transcricionais e a transições de estado celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais ICK (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ICK numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ICK (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ICK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ICK. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ICK e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.