HYPB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402789

Visão geral

SETD2, também conhecido como HYPB, codifica a principal metiltransferase de histonas responsável pela trimetilação da lisina 36 da histona H3 (H3K36me3) ao longo dos corpos de genes ativamente transcritos. Essa modificação coordena o alongamento da transcrição com o processamento co-transcricional de RNA, a organização da cromatina e o recrutamento da maquinaria de reparo do DNA, vinculando a atividade de SETD2 à manutenção da estabilidade genômica. O H3K36me3 dependente de SETD2 também ajuda a determinar a escolha da via de reparo durante a recombinação homóloga e sustenta a dinâmica adequada das forquilhas de replicação. A função alterada de SETD2 e padrões perturbados de metilação de H3K36 são frequentemente estudados no contexto de desregulação epigenética oncogênica, estresse transcricional e defeitos na resposta a danos no DNA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HYPB (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SETD2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SETD2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SETD2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HYPB.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SETD2 para a investigação da sinalização de HYPB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SETD2 críticos para a função HYPB
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SETD2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HYPB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HYPB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SETD2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HYPB Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HYPB (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SETD2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SETD2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.