HSPA1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400479-ACT

HSPA1L codifica um membro da família HSP70 de chaperonas moleculares dependentes de ATP, que sustenta a proteostase ao promover o dobramento de proteínas recém-sintetizadas, prevenir a agregação e facilitar o redobramento de substratos desnaturados por estresse. HSPA1L participa da resposta celular ao choque térmico e interage com redes de co-chaperonas para regular o controle de qualidade proteica, incluindo a estabilização de proteínas de sinalização e a modulação de programas transcricionais adaptativos ao estresse. Por meio dessas funções, HSPA1L pode influenciar vias associadas ao estresse do retículo endoplasmático, à degradação mediada pelo proteassoma e a decisões de sobrevivência celular durante estresse proteotóxico. Alterações na atividade de chaperonas e na sinalização de choque térmico estão associadas a fenótipos relevantes para doenças em contextos de biologia do câncer, neurodegeneração e estresse inflamatório, tornando HSPA1L um alvo útil para estudos mecanísticos de resiliência ao estresse e manutenção do proteoma.

HSPA1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSPA1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSPA1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSPA1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSPA1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSPA1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSPA1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSPA1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSPA1L em células tumorais com expressão de HSPA1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.