HSP70-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-417733-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP70-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP70-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP70-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP70: sc-373867
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP70-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP70-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA1B kodiert das induzierbare Hitzeschockprotein HSP70-2, einen zentralen ATP-abhängigen molekularen Chaperon, der neu synthetisierte und durch Stress denaturierte Proteine stabilisiert, um die Proteostase aufrechtzuerhalten. HSP70-2 ist an der Hitzeschockantwort über eine durch HSF1 regulierte Transkription beteiligt und koordiniert gemeinsam mit Ko-Chaperonen sowie den Ubiquitin-Proteasom- und Autophagiewegen Entscheidungen zu Faltung, Refaltung und „Triage“. Durch die Begrenzung von Proteinaggregation und die Modulation von Stresssignalwegen beeinflusst HSP70-2 das zelluläre Überleben unter proteotoxischem, oxidativem und inflammatorischem Stress. Eine dysregulierte Aktivität des HSP70-Netzwerks wurde in verschiedenen krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderter Stresstoleranz und Protein-Homöostase in Verbindung gebracht, darunter Neurodegeneration, Stressanpassung von Krebszellen und Störungen der Immun-Signalgebung.
HSP70-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.