Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 75: sc-402640-ACT

TRAP1 (HSP 75) es una chaperona mitocondrial de la familia HSP90 que regula el plegamiento de proteínas y el control de calidad dentro de la matriz mitocondrial, apoyando la integridad de la cadena respiratoria y la tolerancia celular al estrés. Al modular la transición de permeabilidad mitocondrial, la homeostasis de especies reactivas de oxígeno y el flujo bioenergético, TRAP1 vincula la actividad chaperona con la adaptación metabólica y las vías de proteostasis. La reprogramación de la función mitocondrial dependiente de TRAP1 se ha relacionado con cambios en la sensibilidad a la apoptosis, las respuestas al estrés oxidativo y los desplazamientos entre la fosforilación oxidativa y la glucólisis en diversos contextos celulares. La expresión o actividad desregulada de TRAP1 se ha asociado con la biología tumoral, la neurodegeneración y otros trastornos en los que la disfunción mitocondrial y el estrés proteotóxico contribuyen a la patología.

HSP 75 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRAP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSP 75 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRAP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSP 75. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRAP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSP 75 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSP 75 en células tumorales con expresión de TRAP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.