HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h): sc-403819-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP 40-4 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP 40-4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNAJA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP 40-4: sc-59554
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403819-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 40-4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403819-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAJA1 kodiert das humane Co-Chaperon der HSP40-Familie HSP 40-4 (auch bekannt als Hdj2), ein J-Domänen-Protein, das die ATPase-Aktivität von HSP70 stimuliert und so Proteinfaltung, Refaltung und Qualitätskontrolle unterstützt. Über Interaktionen mit HSP70 und Klientenproteinen trägt DNAJA1 zur Proteostase im gesamten Zytosol sowie an organellassoziierten Schnittstellen bei und beeinflusst dadurch Stressantworten, Proteintransport und Abbauwege wie das Ubiquitin–Proteasom-System. Eine Fehlregulation von Chaperon-Netzwerken, an denen DNAJA1 beteiligt ist, wurde mit einer veränderten zellulären Toleranz gegenüber proteotoxischem Stress in Verbindung gebracht – mit Relevanz für die Krebsbiologie und neurodegenerative Erkrankungen, bei denen die Belastung durch fehlgefaltete Proteine und Stresssignalwege ausgeprägt ist. Die Funktion von DNAJA1 wird zudem im Kontext von Wirt–Pathogen-Interaktionen und der Stabilität von Signalwegen untersucht, was seine Rolle bei der Aufrechterhaltung funktionsfähiger Proteinkomplexe widerspiegelt.
HSP 40-4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNAJA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNAJA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNAJA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNAJA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.