HS3ST5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415157

Panoramica

HS3ST5 codifica la 3-O-sulfotransferasi 5 dell’eparan solfato–glucosammina, un enzima residente nel Golgi che catalizza la 3-O-solfatazione dei residui di glucosammina durante la biosintesi dei proteoglicani dell’eparan solfato. Questa modifica contribuisce a definire la struttura fine dell’eparan solfato, modellandone le proprietà di legame ai ligandi che influenzano la comunicazione cellula–cellula, l’adesione e la distribuzione dei morfogeni nella matrice extracellulare. Modulando le interazioni dipendenti dall’eparan solfato, HS3ST5 può influenzare vie di segnalazione quali FGF, Wnt, Hedgehog e reti di chemochine che regolano lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Pattern di solfatazione dell’eparan solfato deregolati sono stati associati a un’alterata disponibilità dei fattori di crescita, infiammazione e rimodellamento del microambiente tumorale, rendendo HS3ST5 rilevante per studi meccanicistici delle alterazioni dei glicosaminoglicani associate a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST5 per lo studio della segnalazione di HS3ST5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST5 critici per la funzione di HS3ST5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.