Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HoxB13 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401878-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HoxB13 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HoxB13ダブルニカースプラスミド（h）およびHoxB13ダブルニカースプラスミド（h2）は、HOXB13を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HoxB13 抗体 (F-9): sc-28333
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HoxB13 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401878-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxB13 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401878-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXB13は、ホメオボックス転写因子HoxB13をコードしており、配列特異的にDNAへ結合する調節因子として、前後軸（anterior–posterior）のパターニングの確立を助け、泌尿生殖器系および前立腺系譜における分化プログラムを制御します。発生シグナル伝達経路の下流にある転写ネットワークを調節することで、HoxB13は細胞運命決定、上皮成熟、ならびに組織特異的遺伝子発現に影響を与えます。HOXB13活性の異常や転写回路の改変は、前立腺の生物学や腫瘍性リプログラミングと関連づけられており、系譜可塑性や腫瘍関連の遺伝子制御状態を研究する上で重要な標的となっています。生物医学研究では、HOXB13は転写制御、クロマチン依存的な制御、そして増殖・分化に対する文脈依存的な影響といった観点から、一般に検討されています。
HoxB13 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXB13 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXB13内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXB13の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXB13が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。