HOS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404203-ACT

FBXW11 codifica a proteína humana F-box/WD repeat HOS (também conhecida como β-TrCP2), um componente de reconhecimento de substratos do complexo de ligase E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), que direciona a degradação proteassomal de proteínas regulatórias fosforiladas. Por meio da ubiquitinação de mediadores-chave de sinalização, a HOS influencia vias como a sinalização de NF-κB via proteínas da família IκB e a regulação de Wnt/β-catenina, moldando assim respostas inflamatórias, a progressão do ciclo celular e decisões de destino celular. Alterações na atividade de FBXW11 ou no reconhecimento de substratos podem perturbar a proteostase e a amplitude dos sinais, ligando esse eixo a reprogramações de sinalização associadas ao câncer e a fenótipos imunes/inflamatórios. Como um fator nodal da via de ubiquitina, FBXW11 é frequentemente estudado em contextos de controle transcricional, degrons dependentes de fosforilação e crosstalk entre vias.

HOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBXW11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HOS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBXW11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBXW11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HOS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBXW11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HOS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HOS em células tumorais com expressão de FBXW11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.