Homer-1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424092-ACT

マウスHomer1は、シナプス後肥厚（PSD）に存在する足場タンパク質Homer-1をコードしており、グループI代謝型グルタミン酸受容体とその関連エフェクターを組織化することで、カルシウムシグナル伝達、シナプス可塑性、ならびに活動依存的な遺伝子プログラムを統合的に制御します。Homer-1はEVH1ドメインを介した相互作用により、mGluR1/5をIP3受容体依存的なカルシウム放出に結び付け、さらにShankなどのPSD構成要素とも連携して興奮性シナプスの構築・形態を形成します。HOMER1シグナルの変調は、ストレス関連表現型や発作感受性を含む神経精神疾患および神経変性疾患の文脈において、グルタミン酸作動性神経伝達の破綻や回路リモデリング異常と関連づけられています。即時早期遺伝子（IEG）としてのアイソフォームと長鎖型の足場としての両面を持つHomer-1は、刺激依存的なシナプス適応や受容体トラフィッキングを研究するうえで扱いやすい標的（ノード）となります。

Homer-1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Homer1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Homer-1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Homer1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHomer1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Homer-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHomer1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHomer-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHomer1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHomer-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。