hnRNP U Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401375-ACT

HNRNPU codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea U (hnRNP U), um fator multifuncional de ligação a RNA e DNA que se associa à cromatina e à matriz nuclear para coordenar a regulação transcricional, o processamento do pré-mRNA e a organização do genoma em níveis superiores. A hnRNP U contribui para o splicing co-transcricional, a estabilidade do mRNA e as interações de cromatina de longo alcance, conectando o metabolismo de RNA à arquitetura nuclear e a programas de expressão gênica dependentes do ciclo celular. Alterações na dosagem ou na função de HNRNPU têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e à desregulação da expressão gênica, tornando-o um ponto relevante para o estudo de mecanismos de regulação do genoma. Seu amplo interactoma também relaciona a hnRNP U a redes transcricionais responsivas ao estresse e a vias que governam a diferenciação neuronal e a regulação de genes sinápticos.

hnRNP U O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPU sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP U O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPU em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPU, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP U. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPU nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP U no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP U em células tumorais com expressão de HNRNPU silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.