hnRNP E1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401557-ACT

PCBP1 codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea E1 (hnRNP E1), um fator de ligação a RNA e DNA que coordena a regulação gênica pós-transcricional ao controlar a estabilidade do mRNA, o splicing alternativo, o transporte e a tradução. A hnRNP E1 reconhece elementos de sequência ricos em citosina (C) nos transcritos-alvo e participa de complexos ribonucleoproteicos que acoplam sinais celulares à síntese proteica regulada. Por meio dessas atividades, o PCBP1 contribui para processos celulares que incluem diferenciação, respostas ao estresse e a manutenção da homeostase do proteoma. Alterações na expressão ou na função de PCBP1/hnRNP E1 têm sido associadas a programas de expressão gênica desregulados observados na biologia do câncer e em outros distúrbios ligados ao processamento aberrante de RNA.

hnRNP E1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP E1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP E1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP E1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP E1 em células tumorais com expressão de PCBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.