hnRNP A3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418346

Panoramica

HNRNPA3 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea A3 (hnRNP A3), una proteina legante l’RNA che si associa ai pre‑mRNA e ai trascritti maturi per regolare lo splicing alternativo, la stabilità dell’mRNA e il trasporto nucleo‑citoplasmatico. hnRNP A3 partecipa all’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici e contribuisce a coordinare programmi di espressione genica legati al processamento dell’RNA e alla traduzione. La disregolazione dei membri della famiglia hnRNP è frequentemente associata ad alterazioni del metabolismo dell’RNA, della dinamica dei granuli di stress e dei percorsi di proteostasi. Questi processi sono rilevanti nella biologia delle malattie, in cui una regolazione post‑trascrizionale aberrante e proteine leganti l’RNA inclini all’aggregazione contribuiscono alla disfunzione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HNRNPA3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HNRNPA3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HNRNPA3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP A3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HNRNPA3 per lo studio della segnalazione di hnRNP A3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HNRNPA3 critici per la funzione di hnRNP A3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HNRNPA3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal hnRNP A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HNRNPA3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP A3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR hnRNP A3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HNRNPA3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HNRNPA3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.