HNF-3β CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420890-ACT

Foxa2は、肝細胞核因子3β（HNF-3β）をコードするフォークヘッドボックス型の転写因子であり、マウスにおける初期胚発生および内胚葉の規定過程で、クロマチンのアクセシビリティを先導的に制御するパイオニア因子として機能する。HNF-3βは、肝臓・膵臓・肺の上皮分化を制御する転写プログラムを統括し、代謝恒常性、胆汁酸およびグルコース制御遺伝子ネットワーク、ならびに上皮アイデンティティの維持における役割が確立されている。核内受容体シグナル伝達や発生過程の転写回路との相互作用を通じて、Foxa2は系譜決定、形態形成、組織リモデリングに影響を及ぼす。Foxa2関連遺伝子発現の破綻は、発生異常や代謝表現型の変化と関連づけられており、分化および代謝の研究における機構的ハブとしての有用性を支持している。

HNF-3β CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Foxa2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HNF-3β CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Foxa2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFoxa2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HNF-3βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFoxa2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHNF-3β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFoxa2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHNF-3β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。