HMG-1/HMGB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420871-NIC

Hmgb1 nel topo codifica la proteina associata alla cromatina HMG-1/HMGB1, un fattore architetturale legante il DNA che piega e stabilizza i complessi nucleoproteici per modulare trascrizione, replicazione, ricombinazione e riparazione del DNA. HMGB1 partecipa al rimodellamento della cromatina e alle vie di risposta al danno, inclusi il coordinamento della riparazione per escissione di basi e la segnalazione della riparazione delle rotture a doppio filamento, e può influenzare la segnalazione infiammatoria quando viene rilasciata extracellularmente. Un’attività di HMGB1 deregolata è stata collegata a risposte citochiniche aberranti, neuroinfiammazione e biologia tumorale, rendendola un bersaglio frequente negli studi su immunità innata, risposte allo stress e mantenimento del genoma. Nei modelli murini, la perturbazione di Hmgb1 viene utilizzata per indagare programmi di morte cellulare, infiammazione sterile e controllo trascrizionale in contesti rilevanti per lo sviluppo e per la malattia.

HMG-1/HMGB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hmgb1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hmgb1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hmgb1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hmgb1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.