Plásmido CRISPR de Activación (h) HMG-1/HMGB1: sc-400735-ACT

HMGB1 (HMG-1) es una proteína abundante asociada a la cromatina, no histona, que se une a estructuras de ADN distorsionadas y regula la dinámica de los nucleosomas, los programas de transcripción y la reparación del ADN. En el núcleo contribuye a la estabilidad del genoma al participar en procesos vinculados a la respuesta al estrés replicativo, la reparación por escisión de bases y la reparación de roturas de doble cadena, y también modula la inflamación cuando se libera al exterior celular como un patrón molecular asociado a daño. HMGB1 influye en la señalización de NF-κB y MAPK, y puede conectarse con vías de autofagia y muerte celular mediante interacciones con socios como RAGE y receptores de la familia TLR. La expresión o localización desregulada de HMGB1 se ha asociado con la biología tumoral, afecciones neuroinflamatorias e inflamación estéril, lo que la convierte en una diana ampliamente utilizada en estudios mecanísticos de la regulación de la cromatina y la señalización por estrés.

HMG-1/HMGB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HMGB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HMG-1/HMGB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HMGB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HMGB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HMG-1/HMGB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HMGB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HMG-1/HMGB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HMG-1/HMGB1 en células tumorales con expresión de HMGB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.