HLA-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410821

概要

HLA-Fは非古典的MHCクラスI分子をコードしており、抗原提示細胞とリンパ球の相互作用を形作ることで免疫監視に関与します。具体的には、NK細胞や一部のT細胞に発現する抑制性／活性化受容体に結合することを通じて作用します。高い多型性を示す古典的HLA-Iタンパク質とは異なり、HLA-Fは特徴的な発現動態を示し、細胞内に保持される一方で、細胞ストレス、感染、活性化状態下では細胞表面での発現が増強します。これにより、免疫チェックポイントや免疫寛容の調節に寄与します。HLA-Fは、抗原提示に関連する過程、細胞傷害性応答の制御、炎症組織および腫瘍微小環境における免疫回避機構にも関与します。HLA-Fの発現異常は複数の免疫介在性疾患やがんの文脈で報告されており、免疫活性化、インターフェロン応答、細胞間認識を制御する経路を解明するうえで重要な分子です。

HLA-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHLA-F遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HLA-F内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HLA-Fのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HLA-Fタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HLA-Fシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HLA-F欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HLA-Fの機能に不可欠なHLA-Fエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HLA-Fゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HLA-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHLA-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HLA-F遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HLA-F HDRプラスミド（h）および HLA-F HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHLA-Fホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHLA-F標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。