HLA-E Plasmide Double Nickase (h): sc-403124-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HLA-E Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HLA-E Double Nickase Plasmid (h) e il HLA-E Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HLA-E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HLA-E Antibody (MEM-E/02): sc-51621
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HLA-E Plasmide Double Nickase (h) | sc-403124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-E Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-E codifica una molecola non classica dell’MHC di classe I che presenta un repertorio peptidico ristretto, inclusi i peptidi leader derivati da altre proteine HLA di classe I, per regolare la sorveglianza immunitaria. L’HLA-E di superficie interagisce con recettori inibitori e attivatori come CD94/NKG2A e CD94/NKG2C sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T, modulando le risposte citotossiche e la tolleranza. Attraverso la presentazione dell’antigene e una segnalazione di tipo “immune checkpoint”, HLA-E contribuisce al controllo dell’infiammazione, alle strategie di evasione immunitaria virale e alla modulazione dell’immunogenicità tumorale nel microambiente tumorale. Alterazioni nell’espressione di HLA-E sono state associate a fenotipi di fuga immunitaria e a contesti patologici in cui il riconoscimento da parte di NK/T è perturbato, rendendolo un bersaglio utile per la ricerca di immunologia meccanicistica.
HLA-E Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HLA-E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HLA-E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HLA-E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HLA-E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.