HLA-DQB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403051-ACT

HLA-DQB1 codifica la catena β del complesso maggiore di istocompatibilità di classe II HLA-DQ, che si associa a HLA-DQA per presentare ai linfociti T CD4+ peptidi derivati dall’ambiente extracellulare. Questo asse di presentazione dell’antigene è centrale nell’attivazione dell’immunità adattativa, nella selezione timica e nella tolleranza periferica, plasmando l’aiuto fornito dai linfociti T e le risposte a valle delle cellule B. Le varianti di HLA-DQB1 influenzano la specificità di legame dei peptidi e sono fortemente associate alla predisposizione alle malattie autoimmuni e all’infiammazione mediata dal sistema immunitario, inclusi il diabete di tipo 1 e la celiachia. Un’espressione deregolata di HLA-DQ e un’alterata presentazione dell’antigene possono inoltre influenzare la sorveglianza immunitaria antitumorale e le risposte agli stimoli infiammatori.

HLA-DQB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DQB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DQB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DQB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DQB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DQB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DQB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DQB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DQB1 nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DQB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.