Histone H1⁰ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420754

概要

マウスH1f0は、分化に関連するリンカーヒストンであるヒストンH1⁰をコードしています。H1⁰はヌクレオソームDNAに結合して高次クロマチンの凝縮を安定化させ、ゲノムのアクセス性に影響を与えます。ヌクレオソーム間隔やクロマチン動態を調節することで、H1⁰は細胞周期からの離脱、系譜（ライン）決定、細胞老化の過程における転写プログラムのエピジェネティック制御に寄与します。H1⁰の量や分布の変化は、クロマチン状態やゲノム安定性の変化、ならびにがん生物学や分化異常を伴うその他の疾患で見られる異常な転写制御と関連づけられています。クロマチンの構造を担うタンパク質として、H1⁰はヘテロクロマチンの組織化、DNA損傷応答、長距離遺伝子制御を司る経路においてしばしば研究対象となります。

Histone H10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるH1f0遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、H1f0内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、H1f0のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Histone H10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Histone H10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、H1f0欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Histone H10の機能に不可欠なH1f0エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、H1f0ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Histone H10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHistone H10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、H1f0遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Histone H10 HDRプラスミド（m）および Histone H10 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはH1f0ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のH1f0標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。