Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400388-NIC

O HDAC4 humano codifica a desacetilase de histonas 4, uma HDAC de classe IIa que transita entre o núcleo e o citoplasma para modular a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais. O HDAC4 atua em complexos multiproteicos de correpressão e integra a sinalização dependente de quinase cálcio/calmodulina e de 14-3-3 para regular a expressão gênica dirigida por MEF2, a diferenciação celular e a transcrição responsiva ao estresse. Por meio do controle dependente de desacetilação de substratos de histonas e não histonas, o HDAC4 contribui para vias que governam o desenvolvimento muscular e neuronal, a plasticidade sináptica e a homeostase metabólica. A atividade e a localização desreguladas do HDAC4 têm sido associadas a estados epigenéticos aberrantes observados em contextos neurodesenvolvimentais, neurodegenerativos e oncogênicos, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de repressão transcricional.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HDAC4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HDAC4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HDAC4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HDAC4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.