Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Plasmide Double Nickase (h): sc-400388-NIC

L'HDAC4 umano codifica l'istone deacetilasi 4, una HDAC di classe IIa che trasloca tra nucleo e citoplasma per modulare l'accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. HDAC4 opera in complessi multiproteici co-repressori e integra la segnalazione mediata da chinasi calcio/calmodulina-dipendenti e da 14-3-3 per regolare l'espressione genica guidata da MEF2, la differenziazione cellulare e la trascrizione in risposta allo stress. Attraverso un controllo dipendente dalla deacetilazione di substrati istonici e non istonici, HDAC4 contribuisce a vie che governano lo sviluppo muscolare e neuronale, la plasticità sinaptica e l'omeostasi metabolica. Un'attività e una localizzazione di HDAC4 disregolate sono state collegate a stati epigenetici aberranti osservati in contesti neuroevolutivi, neurodegenerativi e oncogenici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della repressione trascrizionale.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HDAC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HDAC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HDAC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HDAC4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.