Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400388-ACT

HDAC4 codifica a Histona Desacetilase 4, uma HDAC de classe IIa que atua como reguladora da cromatina responsiva a sinais, ligando estímulos extracelulares a programas transcricionais. A HDAC4 transloca-se entre o citoplasma e o núcleo em resposta a quinases dependentes de cálcio/calmodulina e a outros sinais, onde modula os estados de acetilação das histonas e reprime a transcrição, em parte, por meio de interações com fatores de transcrição como o MEF2. Por esses mecanismos, a HDAC4 participa do controle da diferenciação celular, da expressão gênica neuronal e muscular, de respostas ao estresse e do remodelamento epigenético. A atividade ou a localização desreguladas da HDAC4 têm sido implicadas em estados transcricionais patológicos relevantes para processos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, remodelamento cardíaco e alterações de expressão gênica associadas ao câncer.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 4 (HDAC4). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 4 (HDAC4) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 4 (HDAC4) em células tumorais com expressão de HDAC4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.