Histone cluster 1 H3A Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436164-ACT

Hist1h3a codifica a Histona cluster 1 H3A, uma proteína H3 canônica que forma o núcleo dos nucleossomos e ajuda a organizar a arquitetura da cromatina em todo o genoma do camundongo. Por meio de modificações pós-traducionais como metilação e acetilação, a H3 integra sinais que regulam programas transcricionais, o timing da replicação do DNA e a acessibilidade da cromatina durante a progressão do ciclo celular e o desenvolvimento. A dinâmica da histona H3 contribui para a herança epigenética e coordena processos-chave, incluindo o reconhecimento e o reparo de danos ao DNA, a montagem de nucleossomos acoplada à replicação e a formação de heterocromatina. A desregulação da dosagem de histonas ou dos estados de modificação da H3 está amplamente associada à instabilidade genômica e a padrões aberrantes de expressão gênica observados na biologia do câncer e em distúrbios do desenvolvimento, o que sustenta o Hist1h3a como um nó útil para pesquisas em cromatina e epigenética.

Histone cluster 1 H3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hist1h3a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone cluster 1 H3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hist1h3a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hist1h3a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone cluster 1 H3A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hist1h3a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone cluster 1 H3A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone cluster 1 H3A em células tumorais com expressão de Hist1h3a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.