CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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HIF1a Double Nickaseプラスミド (m): sc-420856-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HIF1a Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HIF1aダブルニカースプラスミド（m）およびHIF1aダブルニカースプラスミド（m2）は、Hif1aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HIF1a 抗体 (28b): sc-13515
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HIF1a Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF1a Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-420856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのHif1aは、低酸素誘導因子1α（HIF1a）をコードしており、酸素濃度に感受性をもつ転写因子として、低酸素環境への細胞適応を統括します。低酸素下では、HIF1aはプロリル水酸化酵素‐VHLによる分解を免れ、ARNT（HIF1β）とヘテロ二量体を形成して低酸素応答配列（HRE）に結合し、転写プログラムを再編成します。このシグナル軸は、解糖系代謝、血管新生および赤血球産生プログラム、鉄代謝制御、細胞生存を調節し、PI3K–AKT–mTOR、MAPK、ミトコンドリアストレス経路とも連携します。HIF1a活性の破綻は、虚血や炎症性微小環境、ならびに代謝リモデリングや免疫シグナルの変化が重要な特徴となる腫瘍低酸素モデルにおいて、広く研究されています。
HIF1a ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Hif1a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hif1a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hif1aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hif1aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。