HES1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420832-ACT

O Hes1 de camundongo codifica o represssor transcricional de domínio hélice–alça–hélice básico (bHLH) HES1, um efetor canônico a jusante da sinalização Notch que molda decisões de destino celular ao suprimir genes proneurais e associados à diferenciação. O HES1 participa de oscilações transcricionais que regulam a manutenção de progenitores, o timing da diferenciação e o padrão tecidual em todo o sistema nervoso e em outros órgãos. Por meio de crosstalk com vias como Wnt/β-catenina, Shh e TGF-β, o HES1 ajuda a coordenar o equilíbrio entre proliferação e diferenciação e a especificação de linhagens. A atividade desregulada de HES1 é frequentemente estudada em contextos de sinalização aberrante da via Notch, incluindo distúrbios do desenvolvimento e programas oncogênicos, nos quais estados alterados de progenitores e bloqueios de diferenciação contribuem para os fenótipos de doença.

HES1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hes1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HES1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hes1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hes1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HES1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hes1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HES1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HES1 em células tumorais com expressão de Hes1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.