hemicentin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405850

概要

HMCN1は、機械的ストレスが加わる組織において基底膜の構築を整え、細胞‐マトリックス接着を支える大型の細胞外マトリックス（ECM）糖タンパク質であるヘミセンチン1をコードします。ヘミセンチン1はECMの組み立てやリモデリングに関与し、上皮の完全性、組織形態形成、創傷に伴うマトリックス動態などのプロセスに影響を与えます。HMCN1の破綻や発現制御異常は結合組織および眼の表現型と関連づけられており、遺伝学的研究では加齢黄斑変性（AMD）のリスクと関連するバリアントも報告されていることから、網膜ECM生物学における重要性が示唆されています。ECM構成要素としてのヘミセンチン1は、マトリックスの組織化が細胞移動、メカノトランスダクション、バリア機能をどのように制御するかを研究するための有用な切り口となります。

hemicentin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHMCN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HMCN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HMCN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、hemicentin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、hemicentin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HMCN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• hemicentin-1の機能に不可欠なHMCN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HMCN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• hemicentin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびhemicentin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HMCN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  hemicentin-1 HDRプラスミド（h）および hemicentin-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHMCN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHMCN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。