Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Hec1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406844
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Hec1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Hec1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Hec1 Anticuerpo (C-11): sc-515550
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Hec1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406844 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
NDC80 codifica Hec1, un componente esencial del cinetocoro externo que forma el complejo NDC80 y acopla directamente los microtúbulos del huso a los cromosomas durante la mitosis. Hec1 coordina la alineación (congresión) y la segregación cromosómica al favorecer uniones estables de tipo extremo a extremo con los microtúbulos y contribuir a la señalización del punto de control del ensamblaje del huso, manteniendo así la integridad del genoma. La alteración o desregulación de Hec1 perturba la progresión mitótica, incrementa la inestabilidad cromosómica e interactúa con vías que controlan la aneuploidía y los puntos de control del ciclo celular. Estos procesos se analizan con frecuencia en estudios de trastornos proliferativos y biología de células tumorales, donde la función del cinetocoro y la fidelidad mitótica están alteradas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hec1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NDC80 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NDC80 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NDC80 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hec1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NDC80 para la investigación de la señalización de Hec1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de NDC80 críticos para la función de Hec1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NDC80 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Hec1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Hec1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NDC80. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hec1 (h) y el plásmido HDR Hec1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NDC80 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NDC80 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.